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La sintesi della proteina virale viene effettuata sui ribosomi della cellula. Sintesi dei componenti virali. Sintesi delle proteine ​​virali

I virus contengono solo un tipo di acido nucleico, DNA o RNA. Il DNA virale può essere a filamento singolo o doppio e lineare o circolare. Gli acidi nucleici virali codificano per proteine ​​ed enzimi specifici del virus necessari per la replicazione del virus nella cellula ospite.

Replicazione di virus contenenti DNA procede secondo un meccanismo semiconservativo comune a tutto il DNA. Sulla matrice del DNA virale, viene prima sintetizzato l'mRNA e quindi avviene la formazione delle proteine ​​​​virali. Questo processo è completamente fornito dall'apparato metabolico della cellula ospite.

Replicazione dei virus a RNA avviene in due modi.

Primo va con la partecipazione della RNA polimerasi RNA-dipendente (RNA sintasi o RNA replicasi). È inerente ai virus dell'influenza, al morbillo. Distinguere i virus:

  • contenente (+) - catena di RNA (filo più), che funge sia da mRNA che da genoma, e da virus,
  • contenente un (-) filamento di RNA (filamento meno) che funge solo da genoma.

Esistono anche virus che contengono RNA a doppio filamento.

  1. La catena (+)-RNA del virus può essere utilizzata direttamente nella traduzione come mRNA. Pertanto, quando un virus (+)-RNA (polimiolite, virus dell'epatite A) entra nella cellula, il suo RNA si lega ai ribosomi della cellula e viene tradotto in una catena proteica. Questa catena viene spezzata dalla proteasi della particella virale in 7 proteine, una delle quali è l'RNA sintasi. Dopo la comparsa dell'RNA sintasi inizia la replicazione dell'RNA virale. Nella prima fase, la catena (-) dell'RNA si forma sul filamento (+), come sullo stampo, e nella seconda fase, il filamento (-) funge da stampo per la sintesi dell'RNA (+) catene identiche a quella virale.
  2. I rabdovirus (virus della rabbia, Ebola, Marburg) e i paramixovirus (virus della parainfluenza, del morbillo e della parotite) hanno RNA (-)-strand, che non può essere tradotto direttamente in proteine. Invece della traduzione, questo (-)-RNA viene utilizzato come modello di trascrizione per il (+)-RNA. La trascrizione viene effettuata dalla RNA sintasi, che è presente nella particella virale. Il (+)-RNA virale sintetizzato viene inoltre utilizzato come modello per la sintesi ribosomiale delle proteine ​​virali e come modello per la sintesi (replicazione) della catena (-)-RNA identica a quella virale.
  3. (+-)-RNA (RNA a doppio filamento) contengono reovirus che causano infezioni respiratorie. Il principio di riproduzione di questi virus è lo stesso della replicazione del DNA a doppio filamento, ma invece della DNA polimerasi, funziona la RNA polimerasi (RNA sintasi).

Secondo modo va con la partecipazione della trascrittasi inversa (DNA polimerasi RNA-dipendente, reversetasi). È inerente ai retrovirus (virus dell'immunodeficienza) e parte dei virus oncogeni. L'enzima catalizza tre processi in sequenza:

  • sintesi della catena (-) del DNA su un modello virale (+) -RNA;
  • distruzione dell'RNA virale come parte dell'ibrido RNA-DNA formato;
  • sintesi del filamento (+) del DNA sul filamento (-) del DNA con formazione del DNA a doppio filamento.

Questo DNA dal citoplasma penetra nel nucleo, si integra nel genoma ospite e funge da modello per la sintesi dell'RNA virale con la partecipazione del sistema RNA polimerasi della cellula ospite. Gli RNA virali risultanti vengono rilasciati nel citoplasma, dove iniziano la traduzione delle proteine ​​virali. Da queste proteine ​​e dall'RNA si assemblano particelle virali in grado di infettare nuove cellule.

Virus

I virus sono costituiti da un acido nucleico (DNA o RNA) e da proteine ​​che formano un involucro attorno a questo acido nucleico, cioè sono un complesso nucleoproteico. Alcuni virus contengono lipidi e carboidrati. I virus contengono sempre un tipo di acido nucleico: DNA o RNA. Inoltre, ciascuno degli acidi nucleici può essere sia a filamento singolo che a doppio filamento, sia lineare che circolare.

Le dimensioni dei virus sono 10–300 nm. La forma dei virus: sferica, bastoncellare, filamentosa, cilindrica, ecc.

Capside: il guscio del virus, formato da subunità proteiche, impilate in un certo modo. Il capside protegge l'acido nucleico del virus da vari influssi, garantisce la deposizione del virus sulla superficie della cellula ospite. Il supercapside è caratteristico dei virus organizzati in modo complesso (HIV, influenza, virus dell'herpes). Si verifica durante l'uscita del virus dalla cellula ospite ed è una sezione modificata della membrana nucleare o citoplasmatica esterna della cellula ospite.

Se il virus si trova all'interno della cellula ospite, esiste sotto forma di acido nucleico. Se il virus si trova all'esterno della cellula ospite, allora è un complesso nucleoproteico e questa forma di esistenza libera è chiamata virione. I virus sono altamente specifici; possono utilizzare una cerchia di ospiti strettamente definita per la loro attività di vita.

Nel ciclo di riproduzione del virus si possono distinguere le seguenti fasi.


Deposizione sulla superficie della cellula ospite.

Penetrazione del virus nella cellula ospite (possono entrare nella cellula ospite mediante: a) "iniezione", b) dissoluzione della membrana cellulare da parte degli enzimi virali, c) endocitosi; Una volta all'interno della cellula, il virus trasferisce il suo apparato di sintesi proteica sotto il proprio controllo).

Incorporamento del DNA virale nel DNA della cellula ospite (per i virus contenenti RNA, la trascrizione inversa avviene prima - sintesi del DNA su uno stampo di RNA).

Trascrizione dell'RNA virale.

Sintesi degli acidi nucleici virali.

Autoassemblaggio ed uscita dalla cellula dei virus figli. Quindi la cellula muore o continua ad esistere e produrre nuove generazioni di particelle virali.

Il virus dell'immunodeficienza umana infetta principalmente i linfociti CD4 (aiutanti), sulla cui superficie sono presenti recettori che possono legarsi alla proteina superficiale dell'HIV. Inoltre, l'HIV penetra nelle cellule del sistema nervoso centrale, della neuroglia e dell'intestino. Il sistema immunitario del corpo umano perde le sue proprietà protettive e non è in grado di resistere agli agenti patogeni di varie infezioni. L’aspettativa di vita media di una persona infetta è di 7-10 anni.

La fonte dell'infezione è solo una persona, portatrice del virus dell'immunodeficienza. L'AIDS si trasmette sessualmente, attraverso il sangue e i tessuti contenenti il ​​virus dell'immunodeficienza, dalla madre al feto.

Citologia

La citologia è la scienza della cellula. Studia la struttura e le funzioni delle cellule di organismi unicellulari e multicellulari. Una cellula è un'unità elementare di struttura, funzionamento, crescita e sviluppo di tutti gli esseri viventi. Pertanto, i processi e i modelli caratteristici della citologia sono alla base dei processi studiati da molte altre scienze (anatomia, genetica, embriologia, biochimica, ecc.).

4. Sintesi delle proteine ​​virali

Questa sintesi si basa sullo stesso meccanismo della sintesi proteica nelle cellule normali. Nei picornavirus contenenti RNA, la funzione dell'mRNA viene eseguita dai filamenti più. Il loro RNA virionico a filamento singolo viene tradotto per formare un singolo polipeptide gigante, che viene poi scisso in singole proteine ​​funzionali. Nella sintesi di una proteina virale completa, la traduzione di tutti i geni dell’RNA virale è espressa nel tempo. Negli orto-, rabdo- e paramixes, l'RNA a filamento singolo del virione non viene tradotto, ma viene tradotto il filamento più complementare ad esso, quindi la sintesi delle proteine ​​virali specifiche inizia dopo la formazione dell'mRNA virale (filamento plus), che è complementare al virione, i filamenti meno sono sintetizzati sul filamento più, i filamenti della polimerasi virione RNA-dipendente (RNA trascrittasi), che fa parte del virione come componente strutturale. Gli mRNA sintetizzati dalla virione polimerasi sono monocistronici e molto più corti dell'RNA virionica. Durante un'infezione virale, i polisomi cellulari si disintegrano e si formano polisomi specifici del virus.

La sintesi della proteina virus-specifica dipende dalla sintesi dell'mRNA virale, ma la influenza anche: se la sintesi proteica è disturbata, l'mRNA appena formato risulta sovraccaricato nei siti della sua sintesi e la sua ulteriore sintesi viene inibita.

Le proteine ​​virali durante l'infezione vengono sintetizzate in quantità eccessive rispetto a quelle necessarie per la formazione di un virus infettivo. Ad esempio, nelle cellule infettate dai virus dell’herpes, solo il 35% circa della massa totale di proteine ​​specifiche del virus sintetizzate nelle cellule è incluso nella progenie virale.

Nella maggior parte dei virus la sintesi proteica avviene nel citoplasma; vi sono dubbi sulla localizzazione nucleare della sintesi proteica in alcuni virus. È noto che le proteine ​​virali possono essere sintetizzate in alcune strutture e accumulate in altre. I meccanismi responsabili della migrazione delle proteine ​​virali nel nucleo non sono stati chiariti. È noto solo che l'assenza di arginina nel mezzo porta alla soppressione della migrazione delle proteine ​​strutturali del virus dell'herpes dal sito della loro sintesi (citoplasma) al sito di assemblaggio dei virioni (nucleo), sebbene la sintesi del DNA e le proteine ​​del virus non vengono compromesse.

Nelle diverse fasi del ciclo infettivo si può formare prevalentemente l'uno o l'altro gruppo di proteine ​​virus-specifiche. La loro velocità è regolata sia a livello di trascrizione (con formazione di mRNA) che a livello di traduzione (lettura di mRNA sui ribosomi).

In una cellula infetta, gli mRNA di diversi geni virali si accumulano in modo sproporzionato. Il meccanismo di questa sproporzionalità risiede nella particella virale stessa. Lo stesso meccanismo determina la diversa efficienza di formazione delle diverse proteine. Una particella virale standard contiene una molecola di RNA e fino a 10.000 molecole di proteine. Oltre alle proteine ​​strutturali, in una cellula infetta possono essere sintetizzate anche proteine ​​non strutturali (ma codificate dall’RNA virale). Insieme alla sintesi delle proteine ​​nella cellula durante la riproduzione del virus dell'influenza, avviene anche la sintesi delle catene di carboidrati che compongono le glicoproteine. L'attaccamento dei carboidrati viene effettuato con l'aiuto delle transferasi, che sono enzimi cellulari. Anche la sintesi dei lipidi viene effettuata dalla cellula. L'involucro virale è formato dall'incorporazione di lipidi dalla membrana plasmatica della cellula ospite. La sintesi degli acidi nucleici virali e delle proteine ​​virus-specifiche avviene quasi contemporaneamente ed è almeno 1 ora avanti rispetto alla maturazione delle particelle virali.

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Esistono prove che i meccanismi di adsorbimento dei virus e la loro penetrazione nella cellula non sono gli stessi nei diversi tessuti o su diverse superfici delle cellule epiteliali.

4. Sintesi delle proteine ​​virali

Questa sintesi si basa sullo stesso meccanismo della sintesi proteica nelle cellule normali. Nei picornavirus contenenti RNA, la funzione dell'mRNA viene eseguita dai filamenti più. Il loro RNA virionico a filamento singolo viene tradotto per formare un singolo polipeptide gigante, che viene poi scisso in singole proteine ​​funzionali. Nella sintesi di una proteina virale completa, la traduzione di tutti i geni dell’RNA virale è espressa nel tempo. Negli orto-, rabdo- e paramixes, l'RNA a filamento singolo del virione non viene tradotto, ma viene tradotto il filamento più complementare ad esso, quindi la sintesi delle proteine ​​virali specifiche inizia dopo la formazione dell'mRNA virale (filamento plus), che è complementare al virione, i filamenti meno sono sintetizzati sul filamento più, i filamenti della polimerasi virione RNA-dipendente (RNA trascrittasi), che fa parte del virione come componente strutturale. Gli mRNA sintetizzati dalla virione polimerasi sono monocistronici e molto più corti dell'RNA virionica. Durante un'infezione virale, i polisomi cellulari si disintegrano e si formano polisomi specifici del virus.

La sintesi della proteina virus-specifica dipende dalla sintesi dell'mRNA virale, ma la influenza anche: se la sintesi proteica è disturbata, l'mRNA appena formato risulta sovraccaricato nei siti della sua sintesi e la sua ulteriore sintesi viene inibita.

Le proteine ​​virali durante l'infezione vengono sintetizzate in quantità eccessive rispetto a quelle necessarie per la formazione di un virus infettivo. Ad esempio, nelle cellule infettate dai virus dell’herpes, solo il 35% circa della massa totale di proteine ​​specifiche del virus sintetizzate nelle cellule è incluso nella progenie virale.

Nella maggior parte dei virus la sintesi proteica avviene nel citoplasma; vi sono dubbi sulla localizzazione nucleare della sintesi proteica in alcuni virus. È noto che le proteine ​​virali possono essere sintetizzate in alcune strutture e accumulate in altre. I meccanismi responsabili della migrazione delle proteine ​​virali nel nucleo non sono stati chiariti. È noto solo che l'assenza di arginina nel mezzo porta alla soppressione della migrazione delle proteine ​​strutturali del virus dell'herpes dal sito della loro sintesi (citoplasma) al sito di assemblaggio dei virioni (nucleo), sebbene la sintesi del DNA e le proteine ​​del virus non vengono compromesse.

Nelle diverse fasi del ciclo infettivo si può formare prevalentemente l'uno o l'altro gruppo di proteine ​​virus-specifiche. La loro velocità è regolata sia a livello di trascrizione (con formazione di mRNA) che a livello di traduzione (lettura di mRNA sui ribosomi).

In una cellula infetta, gli mRNA di diversi geni virali si accumulano in modo sproporzionato. Il meccanismo di questa sproporzionalità risiede nella particella virale stessa. Lo stesso meccanismo determina la diversa efficienza di formazione delle diverse proteine. Una particella virale standard contiene una molecola di RNA e fino a 10.000 molecole di proteine. Oltre alle proteine ​​strutturali, in una cellula infetta possono essere sintetizzate anche proteine ​​non strutturali (ma codificate dall’RNA virale). Insieme alla sintesi delle proteine ​​nella cellula durante la riproduzione del virus dell'influenza, avviene anche la sintesi delle catene di carboidrati che compongono le glicoproteine. L'attaccamento dei carboidrati viene effettuato con l'aiuto delle transferasi, che sono enzimi cellulari. Anche la sintesi dei lipidi viene effettuata dalla cellula. L'involucro virale è formato dall'incorporazione di lipidi dalla membrana plasmatica della cellula ospite. La sintesi degli acidi nucleici virali e delle proteine ​​virus-specifiche avviene quasi contemporaneamente ed è almeno 1 ora avanti rispetto alla maturazione delle particelle virali.

5. Assemblaggio dei virioni e loro rilascio dalla cellula

La sintesi dei componenti delle particelle virali nella cellula è disconnessa e può procedere in diverse strutture del nucleo e del citoplasma. I virus che si replicano nel nucleo sono chiamati virus nucleari. Si tratta principalmente di virus contenenti DNA: adeno-, papova-, parvovirus, virus dell'herpes. I virus che si replicano nel citoplasma sono detti citoplasmatici. Questi includono il virus variola contenente DNA e la maggior parte dei virus contenenti RNA, ad eccezione di orthomyxo e retrovirus. Tuttavia, questa divisione è molto relativa, perché nella riproduzione di entrambi i virus ci sono fasi che si verificano rispettivamente nel citoplasma e nel nucleo.

All'interno del nucleo e del citoplasma può anche essere disaccoppiata la sintesi di molecole specifiche del virus. Quindi, ad esempio, la sintesi di alcune proteine ​​viene effettuata su polisomi liberi e altre su polisomi associati alle membrane. Gli acidi nucleici virali sono sintetizzati in associazione con strutture cellulari lontane dai polisomi che sintetizzano le proteine ​​virali. Con un metodo di riproduzione così disgiuntivo, la formazione di una particella virale è possibile solo se gli acidi nucleici e le proteine ​​virali hanno la capacità, a concentrazione sufficiente, di riconoscersi a vicenda nella varietà delle proteine ​​e degli acidi nucleici cellulari e di combinarsi spontaneamente tra loro altri, cioè, sono capaci di autoassemblarsi.

L'autoassemblaggio si basa sul riconoscimento specifico del nucleo proteico e della proteina-proteina, che può verificarsi a seguito di legami idrofobici ionici e idrogeno, nonché della conformità sterica. Il riconoscimento dell’acido proteico-nucleico è limitato a una piccola regione della molecola dell’acido nucleico ed è determinato da sequenze nucleotidiche uniche nella parte non codificante del genoma virale. Con questo riconoscimento della regione del genoma da parte delle proteine ​​del capside virale, inizia il processo di assemblaggio della particella virale. L'attaccamento delle restanti molecole proteiche viene effettuato a causa di specifiche interazioni proteina-proteina o di interazioni proteina-acido nucleico non specifiche.

La combinazione di una proteina con acidi nucleici virali in una cellula avviene spontaneamente come una reazione di aggregazione puramente fisico-chimica che richiede la partecipazione di fattori aggiuntivi (pH, forza ionica, ioni metallici, osmosi, ecc.). Dopo che la concentrazione di RNA virale e proteine ​​raggiunge livello critico; nei virus complessi, i principi di autoassemblaggio sono assicurati dall'inizio alla fine dalla morfogenesi del virione.

Per immaginare lo stadio di maturazione delle particelle virali della progenie nei paramixovirus, è necessario scoprire come la molecola di RNA 50S, circa 10mila molecole di proteine, lipidi e zuccheri si assemblano in una cellula infetta e formano un insieme morfologicamente e biologicamente particella completa. La maturazione può essere suddivisa in tre fasi: 1) formazione di nucleocapsidi intracellulari; 2) organizzazione della membrana virale; 3) il rilascio di una particella virale matura dalla cellula mediante il cosiddetto germogliamento.

Formazione del nucleocapside. La rapida incorporazione dell'RNA 50S nel capside è dovuta all'accumulo relativamente rapido e abbondante di c. proteine ​​strutturali delle cellule infette dei nucleocapsidi. La formazione (assemblaggio) dei virioni avviene per autoassemblaggio, dovuto al "riconoscimento" dell'RNA da parte delle proteine. Si ritiene che la proteina P sia la proteina di riconoscimento perché è strettamente legata all'RNA nelle particelle virali. Si ritiene che la regione riconoscibile dell'RNA sia localizzata all'estremità 5" della molecola. I nucleocapsidi si accumulano nel citoplasma delle cellule infette e la velocità di formazione dei nucleocapsidi intracellulari è molto più elevata della velocità di formazione del virus. La formazione dei nucleocapsidi intracellulari è associato nel tempo alla biosintesi dell'RNA 50S.

Non insegna che sia morto. nella tecnologia. Embrioni di 24 ore - traumatismi; se non vengono rilevati segni - 2-3 passaggi ciechi. Indicazioni: 1.Metodo macroscopico - valutazione visiva dei cambiamenti visibili in C / E: 1) embrione - morte (non nelle prime 24 ore); sottosviluppo; sviluppo sproporzionato separatamente. parti del corpo; contorto collo, embrione stesso; emorragie sul corpo (più spesso nella regione occipitale) - singole, multiple, confluenti; cambiamenti interni organi (ingrossamento, traboccamento di sangue, emorragie, anemia, distrofia nei reni, fegato, cuore, cistifellea); 2) CAO - butterate, emorragie, desolazione o traboccamento dei vasi sanguigni; 3) liquidi - aumento. volume di allantoisna. liquido o ridurre. volume amniotico, cambiamento. colore, consistenza, impurità); 2. Metodo microscopico - microscopia ottica - corpi inclusi, CPD, simplasti; 3) mediante emoagglutinir. dei-e del virus - gocciolamento RGA (sperone n. 55).

45. Coltivazione di virus in colture cellulari.

1. Selezione: K/K deve essere sensibile al virus, dalle cellule dell'organo bersaglio è naturalmente suscettibile. animale senza segni di degenerazione; 2. Ottenere virus. materiale (sperone n. 39); 4. Infezione di C / C: 1) metodo di contatto: l'ambiente orale viene lavato via con la soluzione di Hanks, il virusod viene aggiunto alla provetta. materiale (0,1-0,2 ml), distribuito mediante agitazione, in termostato (t = 37, per 1-2 ore), virusod. si rimuove il materiale, si lava con soluzione di Hank, si cola il supporto. Pietro. ambiente; 2) diffusi: infettano in modo puntuale, il virus da una cellula infetta si diffonde in un'altra; 5. Coltivazione del virus nelle cellule: le provette chiuse vengono poste in un termostato (t = 37) con un angolo di 5 gradi (i materassi sono orizzontali) su rulli (ruotare). Per ogni campione - 4-10 provette + 4-6 tubi di controllo. Nella coltivazione a lungo termine, il terreno viene cambiato ogni 7 giorni. Ogni giorno le provette vengono controllate al microscopio. 6. Indicazione: CPD (arrotondamento, frammentazione, morte), RGAD, test del colore (se l'indicatore cambia colore nel mezzo di supporto, allora non c'è virus nel C / C - le cellule continuano a vivere, rilasciando prodotti metabolici che si spostano il pH verso il lato acido), formazione di placche (appaiono aree scolorite delle cellule uccise dal virus), corpi inclusi (microscopia ottica), RIF.

24. Sintesi di proteine ​​virali. Modi della loro formazione.

Il substrato per la sintesi delle proteine ​​virali sono gli aminoacidi identici agli aminoacidi delle proteine ​​cellulari. Il modello per la sintesi proteica nei virus contenenti DNA è l'RNA messaggero, che si forma sul DNA virale. Gli RNA messaggeri vengono sintetizzati dai substrati della cellula infetta. La sintesi dell'RNA messaggero viene effettuata dalla RNA polimerasi DNA-dipendente, che è presente in una cellula infetta o viene portata dall'esterno con una particella virale. Il processo di sintesi proteica nei virus contenenti RNA avviene senza la partecipazione del DNA. La funzione dell'RNA di formazione virale è svolta dall'RNA virus-specifico.Il componente più importante del sistema di sintesi proteica sono i ribosomi. Quando le cellule vengono infettate da un virus, il processo di sintesi di nuovi ribosomi viene sospeso, mentre i vecchi ribosomi presenti nelle cellule vengono rilasciati e su di essi viene effettuata la sintesi proteica, che nella maggior parte dei virus avviene nel citoplasma. Formazione (morfogenesi) di particelle virali mature e loro uscita dalla cellula. Una particella virale matura (virione) è formata da molecole di acido nucleico e subunità proteiche. La composizione del virus può includere membrane lipoproteiche e altri componenti. La sintesi di una proteina virus-specifica dipende dalla sintesi dell'mRNA virale e la influenza: se la sintesi proteica è disturbata, l'mRNA appena formato risulta sovraccaricato nei siti della sua sintesi e la sua ulteriore sintesi viene inibita. Le proteine ​​virali durante l'infezione vengono sintetizzate in quantità eccessive rispetto a quelle necessarie per la formazione di un virus infettivo. Le proteine ​​virali possono essere sintetizzate in alcune strutture e accumulate in altre. Nelle diverse fasi del ciclo infettivo si può formare prevalentemente l'uno o l'altro gruppo di proteine. In una cellula infetta, gli mRNA di diversi geni virali si accumulano in modo sproporzionato. Lo stesso meccanismo determina la diversa efficienza della formazione delle diverse proteine. Una particella virale standard contiene una molecola di RNA e fino a 10.000 molecole di proteine. Oltre alle proteine ​​strutturali, in una cellula infetta possono essere sintetizzate anche proteine ​​non strutturali (ma codificate dall’RNA virale).